文/羊城晚報(bào)全媒體記者 張華 通訊員 林惠芳圖/受訪者提供

2月28日，今天是第15個(gè)國(guó)際罕見(jiàn)病日，雖然春寒料峭，但廣東省婦幼保健院生殖中心要溫暖這些遭受罕見(jiàn)病的家庭。據(jù)記者了解，2021年12月廣東省婦幼保健院受邀參加了由中國(guó)優(yōu)生優(yōu)育協(xié)會(huì)和貝康醫(yī)療聯(lián)合推出的“圓1000個(gè)罕見(jiàn)病家庭健康生育夢(mèng)”公益項(xiàng)目，獲得20個(gè)公益名額。目前已入組10個(gè)單基因病及罕見(jiàn)病家系，還有10個(gè)名額免費(fèi)相送。

罕見(jiàn)病，是指流行率很低、很少見(jiàn)的疾病，一般為慢性、嚴(yán)重性疾病，常危及生命。世界衛(wèi)生組織將罕見(jiàn)病定義為患病人數(shù)占總?cè)丝诘?.65‰～1‰之間的疾病或病變。至今全球已確認(rèn)的罕見(jiàn)病有六七千種，約占人類總疾病的10%。

我國(guó)人口基數(shù)龐大，2015年，我國(guó)罕見(jiàn)病的患者總?cè)藬?shù)約為1680萬(wàn)人；2020年，這一數(shù)據(jù)已經(jīng)上漲到2000萬(wàn)人，比如成骨不全癥是罕見(jiàn)病中的一種，這些患者是一個(gè)極其脆弱的群體，中國(guó)約有10萬(wàn)名這樣的人。

研究表明，80%以上的罕見(jiàn)病是由遺傳因素導(dǎo)致的，簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，如果夫妻雙方存在相同的缺陷基因，下一代就很可能患病，且早在精子和卵子結(jié)合的那一刻開(kāi)始就已經(jīng)不可避免。如果能從單基因?qū)用娲_診患者的疾病，那么絕大部分查明病因的遺傳病都可以通過(guò)技術(shù)手段避免代際傳遞。所以，要從根本上防止和減少罕見(jiàn)病的發(fā)生，必須要從孕前檢查開(kāi)始。

據(jù)了解，“單基因胚胎植入前遺傳學(xué)檢測(cè)(PGT-M）”（“第三代試管嬰兒”的一種）是一種在胚胎植入前對(duì)胚胎進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)，可以選擇不攜帶致病基因的胚胎進(jìn)行植入，從而生育健康的寶寶，是幫助罕見(jiàn)病家庭徹底擺脫疾病遺傳的有效途徑，也是目前對(duì)阻斷罕見(jiàn)病最有效的一級(jí)預(yù)防措施。

對(duì)于有高危因素的夫婦，尤其是有過(guò)罕見(jiàn)病胎兒孕育經(jīng)歷的，最優(yōu)的方案是孕前對(duì)既往罕見(jiàn)病患兒進(jìn)行詳細(xì)的遺傳學(xué)查因，評(píng)估再次妊娠的再發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，從而指導(dǎo)適宜的妊娠方式；使用PGT-M技術(shù)挑選出正常的胚胎進(jìn)行移植，從而達(dá)到優(yōu)生優(yōu)育的目的。總的來(lái)說(shuō)，目前最有效的阻斷罕見(jiàn)病的方式就是進(jìn)行一級(jí)預(yù)防，這也是預(yù)防、控制和消滅疾病的根本措施。

自2017年起，廣東省婦幼保健院已經(jīng)成功為40余種單基因病（見(jiàn)下圖）患者提供了PGT-M治療，共進(jìn)行了300余個(gè)取卵周期，臨床妊娠率達(dá)65%-70%，活產(chǎn)率達(dá)62%-65%。

來(lái)源 | 羊城晚報(bào)·羊城派

責(zé)編 | 劉欣宇

基金項(xiàng)目：正交試驗(yàn)法優(yōu)選鮮切太白黃精酒蒸炮制工藝

[基金項(xiàng)目]

陜西省教育廳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室科研計(jì)劃項(xiàng)目(No.14JS023)

1 儀器與試藥

1.1 儀器

U-3010紫外可見(jiàn)分光光度儀(日本日立公司)；Sartorius 電子天平(1/10 萬(wàn)，德國(guó))；ST-803型切片機(jī)(瑞安市賽特機(jī)電有限公司)；KQ-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；DHG-9140電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科技有限公司)。

1.2 試藥

雞頭黃精藥材采自陜西太白山，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院王繼濤教授鑒定為百合科植物黃精Polygonatum sibiricum Red.的新鮮根莖。新鮮黃精除去須根，搶水洗，稍晾，切厚片，酒蒸。

葡萄糖對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110833-200904)；黃酒(浙江紹興縣第三酒廠，批號(hào)20141202)；硫酸、0.2%蒽酮-硫酸試液、乙醇等試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃精多糖的測(cè)定

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)105 ℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品33 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL中含無(wú)水葡萄糖0.33 mg)。

2.1.2 供試品溶液的制備 取60 ℃干燥至恒重的本品細(xì)粉約0.25 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加80%乙醇150 mL，置水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過(guò)。殘?jiān)?0%熱乙醇洗滌3次，每次10 mL，將殘?jiān)盀V紙置燒瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過(guò)。殘?jiān)盁坑脽崴礈?次，每次10 mL，合并濾液與洗液，放冷，轉(zhuǎn)移至250 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取1 mL置10 mL具塞干燥試管中，照按2.1.3項(xiàng)下方法，自“加水至2.0 mL”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含無(wú)水葡萄糖的重量(mg)，計(jì)算即得。

2.1.3 線性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分別置10 mL具塞刻度試管中，各加水至2.0 mL，搖勻。在冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，搖勻，放冷后置水浴中保溫10 min，取出，立即置冰水浴中冷卻10 min，取出，以相應(yīng)試劑為空白。照紫外-可見(jiàn)分光光度法(通則0401)，在582 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以濃度(X)為橫坐標(biāo)，吸光度(Y)為縱坐標(biāo)作圖，得回歸方程：Y=7.518 1X+0.163 3，r=0.999 5。線性范圍為0.016 2～0.195 0 mg。

2.1.4 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，按2.1.3項(xiàng)下方法顯色后測(cè)定，重復(fù)測(cè)定6次，記錄吸光度。結(jié)果吸光度RSD=0.04%，表明本方法精密度良好。

2.1.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一樣品6份，每份0.25 g，精密稱定，按2.1.2項(xiàng)下方法制成供試品溶液，每份吸取1 mL，按2.1.3項(xiàng)下方法顯色后測(cè)定，記錄吸光度。結(jié)果RSD=2.10%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，按2.1.3項(xiàng)下方法顯色后，分別在0、10、20、30、40 min時(shí)測(cè)定吸光度。結(jié)果RSD=0.48%，表明供試品溶液在40 min內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.1.7 加樣回收率試驗(yàn) 取已知黃精多糖含量的樣品6份，每份0.25 g，精密稱定，分別加入一定量葡萄糖對(duì)照品溶液，按照2.1.2項(xiàng)下方法制備并測(cè)定，計(jì)算回收率為98.69%，RSD=1.03%，表明本法回收率良好。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)

2.2 水溶性浸出物測(cè)定

取供試品約2 g，精密稱定，置250 mL錐形瓶中，精密加水100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過(guò)，精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的含量(%)。

2.3 醇溶性浸出物測(cè)定

取供試品約2 g，精密稱定，置250 mL的錐形瓶中，精密加稀乙醇100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過(guò)。精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。以干燥品計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量(%)。

2.4 外觀性狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

參照2015版《中華人民共和國(guó)藥典》一部黃精性狀項(xiàng)下規(guī)定，確定評(píng)分。黑色，計(jì)1.0分；棕褐色，計(jì)0.8分；棕色，計(jì)0.5分。嚼之黏性足，微有酒香氣，計(jì)1.0分；嚼之有黏性，酒香氣若有若無(wú)，計(jì)0.8分；嚼之無(wú)黏性，無(wú)酒香氣，計(jì)0.5分。味甜、無(wú)口舌麻木感，計(jì)1.0分；稍甜、稍有口舌麻木感，計(jì)0.8分；甜味淡、有口舌麻木感，計(jì)0.5分。

2.5 酒蒸太白黃精正交試驗(yàn)

在單因素考察和文獻(xiàn)查閱的基礎(chǔ)上，采用L9(34)正交試驗(yàn)考察蒸制時(shí)間(A)、加酒量(B)、潤(rùn)制時(shí)間(C)、燜制時(shí)間(D)4個(gè)因素，每個(gè)因素3個(gè)水平，以飲片外觀性狀、多糖、浸出物的綜合評(píng)分為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選太白黃精酒蒸工藝。因素水平見(jiàn)表2。

表2 因素水平表

綜合評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：為客觀反映酒蒸黃精工藝中各因素對(duì)黃精質(zhì)量的影響，本試驗(yàn)將外觀性狀及黃精功能相關(guān)成分(黃精多糖)以及浸出物含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用綜合評(píng)分法評(píng)定。因黃精多糖是黃精的主要有效成分，且為2015版《中華人民共和國(guó)藥典》一部規(guī)定的黃精的指標(biāo)成分，又因外觀性狀、浸出物含量也對(duì)黃精的質(zhì)量評(píng)價(jià)具有重要意義，因而暫定綜合評(píng)分=(外觀性狀評(píng)分/最高外觀性狀評(píng)分)×20+(黃精多糖含量/黃精多糖最高含量)×50+(水浸出物含量/水浸出物最高含量)×15+(醇浸出物含量/醇浸出物最高含量)×15。結(jié)果分別見(jiàn)表3和表4。

由極差R值分析可知，各因素作用主次順序?yàn)锳DBC，蒸制時(shí)間影響最大，燜制時(shí)間次之，其次是加酒量，最后是潤(rùn)制時(shí)間。最佳工藝為A2B3C1D2。方差分析結(jié)果顯示，P值均小于0.01，4個(gè)因素均為主要影響因素。因而初步認(rèn)為最佳炮制工藝：取黃精，加30%黃酒潤(rùn)6 h，蒸10 h，燜6 h，取出，切4 mm厚片，干燥。

表3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表及結(jié)果(n=2)

表4 方差分析表

注：F 0.01(2，9)=8.02。

2.6 驗(yàn)證試驗(yàn)

按照上述最佳的炮制工藝，取黃精10 kg，平行制備3份黃精樣品。取樣測(cè)定蒸制品中黃精多糖的含量、浸出物含量，并對(duì)外觀性狀進(jìn)行評(píng)分。見(jiàn)表5。

表5 酒黃精最佳炮制工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

結(jié)果表明，確定的工藝操作簡(jiǎn)便，合理可控。

3 討論

黃精由于含有大量的粘液質(zhì)和糖分，在炮制過(guò)程中，除了一般的潔凈處理外，要防止用水浸泡，以防有效成分流失。因此，藥材的軟化以燜潤(rùn)為宜。不管采用何種輔料炮制，都必須使輔料全部被吸盡，內(nèi)無(wú)干心，以便最大限度地發(fā)揮藥物的治療作用[吉山花瑤]。

外觀質(zhì)量評(píng)價(jià)是傳統(tǒng)意義上的中藥飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)是目前單一化學(xué)成分和化學(xué)部位不能替代的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[3]，因此將其作為正交試驗(yàn)的指標(biāo)之一。黃精多糖是黃精的主要藥效成分，具有延緩衰老、降血糖、降血脂、調(diào)節(jié)免疫、防止動(dòng)脈粥樣硬化、抗腫瘤等藥理作用[4-8]，故將其作為評(píng)價(jià)指標(biāo)之一。

本試驗(yàn)僅從外觀性狀、化學(xué)成分和浸出物的角度優(yōu)選太白黃精酒蒸炮制工藝，在以后的研究中，還應(yīng)該采用聯(lián)合化學(xué)成分、指紋圖譜、藥效等多指標(biāo)來(lái)綜合評(píng)價(jià)炮制工藝，以便更好地適用于臨床。

總結(jié)：

鮮切太白黃精最佳酒蒸工藝為取黃精，加30%黃酒，潤(rùn)制6 h，蒸制14 h，燜制6 h，取出，切4 mm厚片，干燥。結(jié)論：優(yōu)選得到的鮮切太白黃精酒蒸炮制工藝穩(wěn)定，可為其產(chǎn)地加工炮制一體化技術(shù)提供試驗(yàn)依據(jù)。