廣州精子庫做供精人授一般需要花費10000-25000元不等，其中包含了前期身體檢查費、供精費用、人授手術費用等等。身體檢查費用一般在5000-6000元左右，供精并不貴，一般只需要支付3000-5000元左右的儲存費即可，人授手術收費一般在3000元左右。當然這是一次供精人授收費，如果是一次失敗就會涉及到第二次供精人授，自然費用也會翻倍。

廣東省計劃生育專科醫院是目前唯一一家廣州精子庫醫院，該院目前已開展了夫精人工授精技術、供精人工授精技術、常規體外受精-胚胎移植技術、卵胞漿內單精子顯微注射技術。在該院做供精試管具體費用如下：

1、前期檢查費用

前期檢查包括生殖系統、傳染疾病、遺傳系統、免疫系統以及身體重要器官的檢查，大概在五、六千左右，由于患者的個體差異，檢查項目會有多有少，費用也會有所不同。

2、供精保存費

因為我國是禁止精子卵子買賣的，所以只要男方符合供精的要求，就可以免費在廣東省計劃生育專科醫院的精子庫申請供精，只不過需要繳納3000-5000元左右的精子保存費。

3、人授手術費

進入人工授精周期助孕流程包括排卵監測、人工授精手術、驗孕等幾個環節，大概需要一個月左右的時間。費用并不貴，一般就在3000-5000元左右。

ELISA樣本制備指南及注意事項

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定義及介紹

ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，酶聯免疫吸附測定）是最基礎的免疫學實驗之一，其理論基礎是抗原抗體的特異性反應。ELISA因其特異性強、靈敏度高、穩定性好而被廣泛使用。ELISA試劑盒檢測樣品包括血清、血漿、細胞培養上清、灌洗液或尿液等生物樣本，實驗操作步驟并不繁瑣，但實驗完成后需要把樣本檢測結果OD值轉化為濃度值，從而供下一步分析所用，因此樣品的預處理對于后續數據處理和結果分析非常重要。

樣本制備指南

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血清

全血樣品于室溫放置2小時或2-8℃過夜后于2-8℃，1000×g離心20min，取上清即可檢測。收集血液的試管應為一次性的無內毒素試管。避免使用溶血，高血脂樣品

2.血漿

抗凝劑推薦使用EDTA-Na

，樣品采集后30min內于2-8℃，1000×g離心15min，取上清即可檢測。

3組織勻漿/組織全蛋白

用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行反復凍融或超聲破碎。最后將勻漿液于2-8℃，5000×g離心5-10min，取上清檢測。

其余方法：在分析天平（AL204型）上，稱量50-100mg組織樣本。在樣本中加入5倍質量體積的含1%PMSF的1×PBS緩沖液；并用小剪刀等工具將組織樣本剪碎（盡可能小塊）。注：1×PBS緩沖液使用前，需加入PMSF，現用現加，PMSF終濃度為1mM。打開超聲破碎儀，將超聲破碎儀的功率調至25%，超聲時間2s，間隔時間5s，總時間2min。放入樣本，冰上超聲3min。視樣本勻漿情況調整總時長。超聲完成后，將樣本放于4℃或冰上裂解30min。打開離心機，將轉速調至12000×g；將樣本放入離心機，離心10min，取上清，按需要分裝，于-20℃貯存。注：留取20μL樣本，用于后續BCA法測定樣本蛋白含量。

組織勻漿液或組織全蛋白中的蛋白濃度對于檢測實驗的影響至關重要，建議樣本蛋白濃度至少1mg/mL以上，較低濃度蛋白的組織勻漿液有可能導致ELISA檢測失敗。

4.細胞提取液

貼壁細胞

用冷的PBS輕輕清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g離心5min后收集細胞；

可直接離心收集。收集的細胞用冷的PBS洗滌3次。每10

個細胞中加入150-200μLPBS重懸(推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑；若含量很低可減少PBS的體積)并通過反復凍融或超聲使細胞破碎。將提取液于2-8℃，1500×g離心10min，取上清檢測。注：留取20μL樣本，用于后續BCA測定。

其余方法：

對于

：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。以2百萬細胞為例，在樣本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS緩沖液，震蕩混勻細胞，4℃或冰上裂解30min。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。必要時可以進行超聲處理，超聲步驟與組織樣本相同。

對于

：離心收集細胞，以2×10

細胞為例，在樣本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS緩沖液，震蕩混勻細胞，4℃或冰上裂解30min。用手指輕彈懸浮細胞以充分裂解。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成（5-10）×10

細胞/管，然后再裂解。必要時可以進行超聲處理，超聲步驟與組織樣本相同。注：1×PBS緩沖液使用前，需加入PMSF，現用現加，PMSF終濃度為1mM。打開離心機，將轉速調至12000×g；將樣本放入離心機，離心10min，取上清，按需要分裝，于-20℃貯存。注：留取20μL樣本，用于后續BCA法測定樣本蛋白含量。

5.細胞培養上清或其他生物體液

收集液體后于2-8℃，1000×g離心20min，除去雜質及細胞碎片。取上清檢測。注：因細胞培養基中的胎牛血清影響或其他生物體液中雜蛋白的影響，不建議進行BCA法測定樣本蛋白含量。

實驗細節與注意事項

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收集血液應避免產生溶血現象。紅細胞破碎，釋放大量的過氧化物酶，會影響ELISA檢測中的辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）的酶促反應，造成檢測結果的不確定性。

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樣品收集后若在1周內進行檢測可保存于2-8℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個月內檢測)，或-80℃(3個月內檢測)，避免反復凍融。在檢測前，冷凍過的樣本應緩慢地融化并離心除去凍融過程產生的沉淀物。室溫混勻后使用。

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試劑盒檢測范圍不等同于樣本中待測物的濃度范圍，建議實驗前通過相關文獻預估樣本中待測物的濃度并通過預實驗確定樣本的實際濃度情況。如果樣品中待測物濃度過高或過低，請對樣本做適當的稀釋或濃縮。

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檢測樣本的稀釋推薦多步稀釋法，常規稀釋檢測為血清/血漿檢測稀釋度為2倍、20倍、200倍；細胞上清稀釋度為5倍、50倍、500倍；建議實驗前通過相關文獻預估樣本中待測物的濃度。

對于稀釋倍數比較大的檢測樣本，參考稀釋方案如下：

稀釋100倍：一步稀釋。取5μL樣本到495μL標準品/樣本稀釋液內，做100倍稀釋；

稀釋1000倍：兩步稀釋。取5μL樣本到95μL標準品/樣本稀釋液內，做20倍稀釋，再取5μL 20倍稀釋樣本到245μL標準品/樣本稀釋液內，做50倍稀釋，總共稀釋1000倍；

稀釋100000倍：三步稀釋。取5μL樣本到195μL標準品/樣本稀釋液內，做40倍稀釋，再取5μL 40倍稀釋樣本到245μL標準品/樣本稀釋液內，做50倍稀釋，最后取5μL 2000倍稀釋樣本到245μL標準品/樣本稀釋液內，做50倍稀釋，總共稀釋100000倍；

每步稀釋時取液量不少于3μL，稀釋倍數不超過100倍。每步稀釋都需混合均勻，避免起泡。

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若所檢樣本不在說明書所列樣本之中，建議做預實驗驗證其檢測有效性。

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若使用化學裂解液制備組織勻漿或細胞提取液，由于引入某些化學物質會導致ELISA測值出現偏差。

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某些重組蛋白可能與試劑盒中捕獲或檢測抗體不匹配而出現不能檢測的情況。

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對于組織勻漿、組織全蛋白、細胞提取液等蛋白提取樣本，經BCA法測定樣本蛋白含量后，建議進行蛋白濃度的統一化，避免因組織重量、細胞數、產物體積等因素造成的人為誤差；例如，統一全部檢測樣本濃度為1-2mg/mL，進行后續的稀釋和檢測。