基金項目：正交試驗法優選鮮切太白黃精酒蒸炮制工藝

[基金項目]

陜西省教育廳重點實驗室科研計劃項目(No.14JS023)

1 儀器與試藥

1.1 儀器

U-3010紫外可見分光光度儀(日本日立公司)；Sartorius 電子天平(1/10 萬，德國)；ST-803型切片機(瑞安市賽特機電有限公司)；KQ-400KDE型高功率數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；DHG-9140電熱恒溫鼓風干燥箱(上海一恒科技有限公司)。

1.2 試藥

雞頭黃精藥材采自陜西太白山，經陜西中醫藥大學藥學院王繼濤教授鑒定為百合科植物黃精Polygonatum sibiricum Red.的新鮮根莖。新鮮黃精除去須根，搶水洗，稍晾，切厚片，酒蒸。

葡萄糖對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110833-200904)；黃酒(浙江紹興縣第三酒廠，批號20141202)；硫酸、0.2%蒽酮-硫酸試液、乙醇等試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 黃精多糖的測定

2.1.1 對照品溶液的制備 取經105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品33 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL中含無水葡萄糖0.33 mg)。

2.1.2 供試品溶液的制備 取60 ℃干燥至恒重的本品細粉約0.25 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加80%乙醇150 mL，置水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過。殘渣用80%熱乙醇洗滌3次，每次10 mL，將殘渣及濾紙置燒瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過。殘渣及燒瓶用熱水洗滌4次，每次10 mL，合并濾液與洗液，放冷，轉移至250 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取1 mL置10 mL具塞干燥試管中，照按2.1.3項下方法，自“加水至2.0 mL”起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中含無水葡萄糖的重量(mg)，計算即得。

2.1.3 線性關系考察 精密量取對照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分別置10 mL具塞刻度試管中，各加水至2.0 mL，搖勻。在冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，搖勻，放冷后置水浴中保溫10 min，取出，立即置冰水浴中冷卻10 min，取出，以相應試劑為空白。照紫外-可見分光光度法(通則0401)，在582 nm波長處測定吸光度。以濃度(X)為橫坐標，吸光度(Y)為縱坐標作圖，得回歸方程：Y=7.518 1X+0.163 3，r=0.999 5。線性范圍為0.016 2～0.195 0 mg。

2.1.4 精密度試驗 取同一供試品溶液，按2.1.3項下方法顯色后測定，重復測定6次，記錄吸光度。結果吸光度RSD=0.04%，表明本方法精密度良好。

2.1.5 重復性試驗 取同一樣品6份，每份0.25 g，精密稱定，按2.1.2項下方法制成供試品溶液，每份吸取1 mL，按2.1.3項下方法顯色后測定，記錄吸光度。結果RSD=2.10%，表明本方法重復性良好。

2.1.6 穩定性試驗 取同一供試品溶液，按2.1.3項下方法顯色后，分別在0、10、20、30、40 min時測定吸光度。結果RSD=0.48%，表明供試品溶液在40 min內基本穩定。

2.1.7 加樣回收率試驗 取已知黃精多糖含量的樣品6份，每份0.25 g，精密稱定，分別加入一定量葡萄糖對照品溶液，按照2.1.2項下方法制備并測定，計算回收率為98.69%，RSD=1.03%，表明本法回收率良好。結果見表1。

表1 加樣回收率試驗

2.2 水溶性浸出物測定

取供試品約2 g，精密稱定，置250 mL錐形瓶中，精密加水100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量(%)。

2.3 醇溶性浸出物測定

取供試品約2 g，精密稱定，置250 mL的錐形瓶中，精密加稀乙醇100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過。精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。以干燥品計算供試品中醇溶性浸出物的含量(%)。

2.4 外觀性狀評分標準

參照2015版《中華人民共和國藥典》一部黃精性狀項下規定，確定評分。黑色，計1.0分；棕褐色，計0.8分；棕色，計0.5分。嚼之黏性足，微有酒香氣，計1.0分；嚼之有黏性，酒香氣若有若無，計0.8分；嚼之無黏性，無酒香氣，計0.5分。味甜、無口舌麻木感，計1.0分；稍甜、稍有口舌麻木感，計0.8分；甜味淡、有口舌麻木感，計0.5分。

2.5 酒蒸太白黃精正交試驗

在單因素考察和文獻查閱的基礎上，采用L9(34)正交試驗考察蒸制時間(A)、加酒量(B)、潤制時間(C)、燜制時間(D)4個因素，每個因素3個水平，以飲片外觀性狀、多糖、浸出物的綜合評分為評價指標，優選太白黃精酒蒸工藝。因素水平見表2。

表2 因素水平表

綜合評分標準：為客觀反映酒蒸黃精工藝中各因素對黃精質量的影響，本試驗將外觀性狀及黃精功能相關成分(黃精多糖)以及浸出物含量作為評價指標，采用綜合評分法評定。因黃精多糖是黃精的主要有效成分，且為2015版《中華人民共和國藥典》一部規定的黃精的指標成分，又因外觀性狀、浸出物含量也對黃精的質量評價具有重要意義，因而暫定綜合評分=(外觀性狀評分/最高外觀性狀評分)×20+(黃精多糖含量/黃精多糖最高含量)×50+(水浸出物含量/水浸出物最高含量)×15+(醇浸出物含量/醇浸出物最高含量)×15。結果分別見表3和表4。

由極差R值分析可知，各因素作用主次順序為ADBC，蒸制時間影響最大，燜制時間次之，其次是加酒量，最后是潤制時間。最佳工藝為A2B3C1D2。方差分析結果顯示，P值均小于0.01，4個因素均為主要影響因素。因而初步認為最佳炮制工藝：取黃精，加30%黃酒潤6 h，蒸10 h，燜6 h，取出，切4 mm厚片，干燥。

表3 正交試驗設計表及結果(n=2)

表4 方差分析表

注：F 0.01(2，9)=8.02。

2.6 驗證試驗

按照上述最佳的炮制工藝，取黃精10 kg，平行制備3份黃精樣品。取樣測定蒸制品中黃精多糖的含量、浸出物含量，并對外觀性狀進行評分。見表5。

表5 酒黃精最佳炮制工藝驗證試驗

結果表明，確定的工藝操作簡便，合理可控。

3 討論

黃精由于含有大量的粘液質和糖分，在炮制過程中，除了一般的潔凈處理外，要防止用水浸泡，以防有效成分流失。因此，藥材的軟化以燜潤為宜。不管采用何種輔料炮制，都必須使輔料全部被吸盡，內無干心，以便最大限度地發揮藥物的治療作用[吉山花瑤]。

外觀質量評價是傳統意義上的中藥飲片質量標準，同時是目前單一化學成分和化學部位不能替代的評價標準[3]，因此將其作為正交試驗的指標之一。黃精多糖是黃精的主要藥效成分，具有延緩衰老、降血糖、降血脂、調節免疫、防止動脈粥樣硬化、抗腫瘤等藥理作用[4-8]，故將其作為評價指標之一。

本試驗僅從外觀性狀、化學成分和浸出物的角度優選太白黃精酒蒸炮制工藝，在以后的研究中，還應該采用聯合化學成分、指紋圖譜、藥效等多指標來綜合評價炮制工藝，以便更好地適用于臨床。

總結：

鮮切太白黃精最佳酒蒸工藝為取黃精，加30%黃酒，潤制6 h，蒸制14 h，燜制6 h，取出，切4 mm厚片，干燥。結論：優選得到的鮮切太白黃精酒蒸炮制工藝穩定，可為其產地加工炮制一體化技術提供試驗依據。

無錫目前有4家醫院開展了輔助生殖技術，其中在無錫生殖科醫院排行較好的醫院都有無錫市婦幼保健院、江南大學附屬醫院、解放軍第904醫院等醫院，這幾家醫院都有開展夫精人工授精技術、常規體外受精-胚胎移植技術、卵胞漿內單精子顯微注射技術，且成功率均在45%以上，算是當地較為受歡迎的幾家試管嬰兒醫院。

無錫當地其實有非常多做試管嬰兒技術不錯的生殖科醫院，這些醫院每年光生殖科年診量都在上千周期，但具體選哪家更好，還是要看患者個人情況決定，下面就為大家介紹無錫生殖科醫院排行：

無錫生殖科醫院排行排名醫院名稱成功率開展技術1無錫市婦幼保健院40%-55%夫精人授、一代/二代試管嬰兒2江南大學附屬醫院40%-50%夫精人授、一代/二代試管嬰兒3解放軍第904醫院40%-50%夫精人授、一代/二代試管嬰兒4無錫市人民醫院15%-25%夫精人授