滴定分析又叫容量分析，是將一種已知準(zhǔn)確濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液滴加到被測定物質(zhì)的溶液中，直到被測定物質(zhì)與所加標(biāo)準(zhǔn)溶液完全反應(yīng)為止，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的所用體積和濃度計(jì)算出物質(zhì)的含量。液體體積的精密測量，是滴定分析的重要操作，是獲得良好分析結(jié)果的重要因素，為此，必須了解如何正確使用容量分析儀器。

滴定管是滴定時(shí)可以準(zhǔn)確測量滴定劑消耗體積的玻璃儀器，它是一根具有精密刻度，內(nèi)徑均勻的細(xì)長玻璃管，可連續(xù)的根據(jù)需要放出不同體積的液體，并準(zhǔn)確讀出液體體積的量器。

根據(jù)長度和容積的不同，滴定管可分為常量滴定管、半微量滴定管和微量滴定管。

常量滴定管容積有50mL、25mL，刻度最小0.1mL，最小可讀到0.01mL。半微量滴定管容量10mL，刻度最小0.05mL，最小可讀到0.01mL。其結(jié)構(gòu)一般與常量滴定管較為類似。微量滴定管容積有1mL、2mL、5mL、10mL，刻度最小0.01mL，最小可讀到0.001mL。此外還有半微量半自動(dòng)滴定管，它可以自動(dòng)加液，但滴定仍需手動(dòng)控制。

滴定管一般分為兩種，酸式滴定管和堿式滴定管。

酸式滴定管又稱具塞滴定管，它的下端有玻璃旋塞開關(guān)，用來裝酸性溶液與氧化性溶液及鹽類溶液，不能裝堿性溶液如NaOH等。堿式滴定管又稱無塞滴定管，它的下端有一根橡皮管，中間有一個(gè)玻璃珠，用來控制溶液的流速，它用來裝堿性溶液與無氧化性溶液，凡可與橡皮管起作用的溶液均不可裝入堿式滴定管中，如KMnO4，K2Cr2O7，碘液等。由于不怕堿的聚四氟乙烯活塞的使用，克服了普通酸式滴定管怕堿的缺點(diǎn)，使酸式滴定管可以做到酸堿通用，所以堿式滴定管的使用大為減少。我們的實(shí)驗(yàn)中就使用這種聚四氟乙烯活塞滴定管。

一、滴定管使用前的準(zhǔn)備

1、檢查試漏

滴定管洗凈后，先檢查旋塞轉(zhuǎn)動(dòng)是否靈活，是否漏水。先關(guān)閉旋塞，將滴定管充滿水，用濾紙?jiān)谛車凸芗馓帣z查。然后將旋塞旋轉(zhuǎn)180度，直立兩分鐘，再用濾紙檢查。如漏水，酸式管涂凡士林；堿式滴定管使用前應(yīng)先檢查橡皮管是否老化，檢查玻璃珠是否大小適當(dāng)，若有問題，應(yīng)及時(shí)更換活塞涂凡士林。

2、滴定管的洗滌

滴定管使用前必須先洗滌，洗滌時(shí)以不損傷內(nèi)壁為原則。洗滌前，關(guān)閉旋塞，倒入約10mL洗液，打開旋塞，放出少量洗液洗滌管尖，然后邊轉(zhuǎn)動(dòng)邊向管口傾斜，使洗液布滿全管。最后從管口放出（也可用鉻酸洗液浸洗）。然后用自來水沖凈。再用蒸餾水洗三次，每次10～15mL。

堿式滴定管的洗滌方法與酸式滴定管不同，堿式滴定管可以將管尖與玻璃珠取下，放入洗液浸洗。管體倒立入洗液中，用吸耳球?qū)⑾匆何舷礈臁?/p>

3、潤洗

滴定管在使用前還必須用操作溶液潤洗三次，每次10～15mL。潤洗液棄去。

4、裝液排氣泡

洗滌后再將操作溶液注入至零線以上，檢查活塞周圍是否有氣泡。若有，開大活塞使溶液沖出，排出氣泡。 滴定劑裝入必須直接注入，不能使用漏斗或其他器皿輔助。

堿式滴定管排氣泡的方法：將堿式滴定管管體豎直，左手拇指捏住玻璃珠，使橡膠管彎曲，管尖斜向上約45度，擠壓玻璃珠處膠管，使溶液沖出，以排除氣泡。

5、讀初讀數(shù)

放出溶液后（裝滿或滴定完后）需等待一至二分鐘后方可讀數(shù)。讀數(shù)時(shí)，將滴定管從滴定管架上取下，左手捏住上部無液處，保持滴定管垂直。視線與彎月面最低點(diǎn)刻度水平線相切。視線若在彎月面上方，讀數(shù)就會(huì)偏高；若在彎月面下方，讀數(shù)就會(huì)偏低。 若為有色溶液，其彎月面不夠清晰，則讀取液面最高點(diǎn)。一般初讀數(shù)為0.00或0～1mL之間的任一刻度，以減小體積誤差。

有的滴定管背面有一條藍(lán)帶，稱為藍(lán)帶滴定管。藍(lán)帶滴定管的讀數(shù)與普通滴定管類似，當(dāng)藍(lán)帶滴定管盛溶液后將有兩個(gè)彎月面相交，此交點(diǎn)的位置即為藍(lán)帶滴定管的讀數(shù)位置。

二、滴定

1、滴定操作

滴定時(shí)，應(yīng)將滴定管垂直地夾在滴定管夾上，滴定臺(tái)應(yīng)呈白色。滴定管離錐瓶口約1cm，用左手控制旋塞，拇指在前，食指中指在后，無名指和小指彎曲在滴定管和旋塞下方之間的直角中。轉(zhuǎn)動(dòng)旋塞時(shí)，手指彎曲，手掌要空。右手三指拿住瓶頸，瓶底離臺(tái)約2～3cm，滴定管下端深入瓶口約1cm，微動(dòng)右手腕關(guān)節(jié)搖動(dòng)錐形瓶，邊滴邊搖使滴下的溶液混合均勻。搖動(dòng)的錐瓶的規(guī)范方式為：右手執(zhí)錐瓶頸部，手腕用力使瓶底沿順時(shí)針方向畫圓，要求使溶液在錐瓶內(nèi)均勻旋轉(zhuǎn)，形成漩渦，溶液不能有跳動(dòng)。管口與錐瓶應(yīng)無接觸。

堿式滴定管操作方法：滴定時(shí)，以左手握住滴定管，拇指在前，食指在后，用其他指頭輔助固定管尖。 用拇指和食指捏住玻璃珠所在部位，向前擠壓膠管，使玻璃珠偏向手心，溶液就可以從空隙中流出。

2、滴定速度

液體流速由快到慢，起初可以“連滴成線”，之后逐滴滴下，快到終點(diǎn)時(shí)則要半滴半滴的加入。半滴的加入方法是：小心放下半滴滴定液懸于管口，用錐瓶內(nèi)壁靠下，然后用用洗瓶沖下。

3、終點(diǎn)操作

當(dāng)錐瓶內(nèi)指示劑指示終點(diǎn)時(shí)，立刻關(guān)閉活塞停止滴定。洗甁淋洗錐形甁內(nèi)壁。取下滴定管，右手執(zhí)管上部無液部分，使管垂直，目光與液面平齊，讀出讀數(shù)。讀數(shù)時(shí)應(yīng)估讀一位。

滴定結(jié)束，滴定管內(nèi)剩余溶液應(yīng)棄去，洗凈滴定管，夾在夾上備用。

三、注意事項(xiàng)

1、滴定時(shí)，左手不允許離開活塞，放任溶液自己流下。

2、滴定時(shí)目光應(yīng)集中在錐形瓶內(nèi)的顏色變化上，不要去注視刻度變化，而忽略反應(yīng)的進(jìn)行。

3、 一般每個(gè)樣品要平行滴定三次，每次均從零線開始，每次均應(yīng)及時(shí)記錄在實(shí)驗(yàn)記錄表格上，不允許記錄到其他地方。

4、使用堿式滴定管注意事項(xiàng)

（1）用力方向要平，以避免玻璃珠上下移動(dòng)。

（2）不要捏到玻璃珠下側(cè)部分，否則有可能使空氣進(jìn)入管尖形成氣泡。

（3）擠壓膠管過程中不可過分用力，以避免溶液流出過快。

5、滴定也可在燒杯中進(jìn)行，方法同上，但要用玻棒或電磁攪拌器攪拌。

自從帕特里克和羅伯特于1978年7月25日在英國奧海姆市成功操作了人類史上第一例試管嬰兒，大量不孕夫婦借助試管技術(shù)獲得了希望和幸福，這是人類歷史上首次通過醫(yī)學(xué)手段輔助的成功生殖，是人類醫(yī)學(xué)史上的奇跡。

諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)?lì)C獎(jiǎng)詞

什么是試管嬰兒？

試管嬰兒是俗稱，專業(yè)名詞稱為試管內(nèi)受精技術(shù)或醫(yī)學(xué)輔助生殖技術(shù)，該技術(shù)的一個(gè)關(guān)鍵特征是以適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)手段攝取女性卵細(xì)胞和男性精液，之后在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行組合培養(yǎng)，培養(yǎng)成為胚胎或囊胚后通過醫(yī)療手段移植回女性身體。

對(duì)于不孕不育家庭，試管嬰兒技術(shù)是目前最安全有效的方法，今天全球每年有超過500萬個(gè)試管嬰兒出生，該技術(shù)比健康的年輕夫婦的自發(fā)受孕更有效。

隨著社會(huì)的進(jìn)步，科學(xué)也在不斷發(fā)展，試管嬰兒作為一種很安全的輔助生殖手段，解決了很多不孕不育癥難題，幫助很多不孕不育患者實(shí)現(xiàn)了生育，擁有一個(gè)健康完整的家。

目前試管嬰兒已經(jīng)發(fā)展了四代，所謂的四代并不是說技術(shù)更新越往后越厲害，他們只是針對(duì)不同患者的不用技術(shù)而已，讓我們來分別看看吧。

第一代試管嬰兒技術(shù)

學(xué)名“體外受精-胚胎移植或常規(guī)試管嬰兒”，即取出卵子和精子后，將其放入實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)皿內(nèi)自然受精，并培育至第3天8細(xì)胞的早期胚胎，再移植回女性子宮腔內(nèi)，使其著床并發(fā)育成胎兒的過程。

適應(yīng)范圍：女方因素導(dǎo)致的不孕不育，如輸卵管粘連，阻塞，子宮內(nèi)膜異位，卵泡發(fā)育和排卵異常。

第二代試管嬰兒技術(shù)

學(xué)名“卵細(xì)胞漿內(nèi)精子注射技術(shù)”，與第一代試管嬰兒技術(shù)不同的是，再完成取卵和取精后，精子進(jìn)入卵子的受精過程不再依靠自己的力量，而是借助顯微系統(tǒng)，使用超細(xì)針管吸取形態(tài)正常，活力好的精子人工方式直接注入卵細(xì)胞漿內(nèi)完成體外受精。

適應(yīng)范圍：該技術(shù)主要適用于男性嚴(yán)重少，弱，畸精癥及無精子癥（可通過附睪或睪丸穿刺獲取精子），不能自主完成受精或是想提高受精率的情況。

第三代試管嬰兒技術(shù)

學(xué)名“胚胎移植前遺傳學(xué)篩查/診斷(PGS/PGD）”，是在第一，二代的基礎(chǔ)上，將早期胚胎繼續(xù)培育第5天形成由100多個(gè)細(xì)胞組成且內(nèi)外細(xì)胞分化明顯的囊胚，再取其外圍細(xì)胞（以后發(fā)育成胎盤的部分，不會(huì)傷害胎兒主體）的遺傳物質(zhì)進(jìn)行PGS/PGD基因檢測，判斷胚胎是否存在染色體異常，是否受遺傳性疾病的影響，從而篩選出健康的囊胚進(jìn)行移植。

適應(yīng)范圍：患有染色體疾病，遺傳性疾病以及大齡，多次IVF失敗，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)，多次胎停或者已生育過缺陷的家庭，以及追求優(yōu)生優(yōu)育和高成功率的家庭。

第四代試管嬰兒技術(shù)

學(xué)名“卵胞漿置換技術(shù)”，是以老化卵子的基因加上年輕卵子的細(xì)胞質(zhì)來合成新的卵子，卵胞漿置換也俗稱第四代試管嬰兒胚胞轉(zhuǎn)移技術(shù)，是胞漿置換領(lǐng)域的最新嘗試，以老化卵子的基因加上年輕卵子的細(xì)胞質(zhì)來合成新的卵子。卵胞漿置換也俗稱第四代試管嬰兒(或稱三人試管嬰兒)，細(xì)胞質(zhì)置換技術(shù)，能更好的應(yīng)對(duì)老化卵子問題，提高大齡女性的妊娠可能性。其胞漿里的遺傳基因不到1%，主要攜帶基因的還是卵子的細(xì)胞核將高齡患者的卵細(xì)胞核取出，放置在年輕卵子的卵細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行培養(yǎng)，大幅度改善卵子質(zhì)量和解決卵子老化問題，極大地提高高齡患者的試管嬰兒成功率。

適應(yīng)范圍：對(duì)于35歲以上卵子質(zhì)量較差、同時(shí)想要將自己的卵子用于試管嬰兒流程的患者來說，這是一個(gè)很好的解決方案。

試管嬰兒流程圖解

試管嬰兒流程圖（安心歐孕繪制）

上圖中所有流程即為第一代試管技術(shù)；

實(shí)驗(yàn)室受精和培養(yǎng)的人工干預(yù)優(yōu)選即為第二代試管技術(shù)；

胚胎/囊胚移植前進(jìn)行的基因篩查和診斷即為第三代試管技術(shù)；

第四代技術(shù)見下圖：

第四代試管嬰兒圖解（安心歐孕繪制）

實(shí)驗(yàn)室延時(shí)監(jiān)控技術(shù)

延時(shí)監(jiān)控技術(shù)用于定期檢查胚胎的發(fā)育，然后由計(jì)算機(jī)分析該信息并計(jì)算結(jié)果。在該技術(shù)出現(xiàn)以前，實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)師需要每天將胚胎從培養(yǎng)箱中取出一次，并由臨床醫(yī)生進(jìn)行分析，延時(shí)監(jiān)控技術(shù)和計(jì)算機(jī)模擬建模計(jì)算可以使胚胎留在培養(yǎng)箱中，并使臨床醫(yī)生清晰的對(duì)胚胎的狀態(tài)做出判斷。

延時(shí)監(jiān)控技術(shù)可以每20分鐘、10分鐘或5分鐘進(jìn)行一次拍攝和計(jì)算，具體取決于診所使用的設(shè)備和實(shí)際操作，間隔時(shí)間越短，可用于分析的信息越詳細(xì)，最終計(jì)算機(jī)會(huì)使用建模的算法來分析胚胎的發(fā)育，并確定哪些胚胎更有可能成功發(fā)育成嬰兒。

延時(shí)監(jiān)控技術(shù)還可以使人們更加精確地了解胚胎的基因?qū)W形態(tài)，研究發(fā)現(xiàn)具有染色體異常的胚胎需要超過100個(gè)小時(shí)才能進(jìn)入胚泡期，使用這項(xiàng)新技術(shù)可以識(shí)別出有染色體異常風(fēng)險(xiǎn)的胚胎。

胚胎發(fā)育的時(shí)機(jī)至關(guān)重要，計(jì)算機(jī)能夠識(shí)別哪些胚胎延遲了發(fā)育，這些胚胎盡管表面看上去與正常的相似，但實(shí)際上成功的機(jī)會(huì)減少了。

延時(shí)監(jiān)控技術(shù)使科學(xué)家對(duì)胚胎健康有了一些新的了解，過去盡管所有胚胎看起來都同樣健康，但從統(tǒng)計(jì)學(xué)上講，只有25％的胚胎具有發(fā)育為嬰兒的潛力，通過新技術(shù)，科學(xué)家將能夠確定哪些胚胎是25％其中的，并選擇它們進(jìn)行植入。

因?yàn)樵摷夹g(shù)剛剛出現(xiàn)，尚未完全發(fā)揮作用，但毫無疑問的是使用延時(shí)監(jiān)控技術(shù)會(huì)顯著提高試管嬰兒成功率，隨著越來越多的診所和越來越多的夫妻選擇使用這種方法，科學(xué)家將對(duì)如何選擇最有潛力的胚胎有更好的了解。

其他試管嬰兒相關(guān)技術(shù)

細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)IVM技術(shù)，專門針對(duì)一些卵子成熟障礙的不孕患者，特別是那些患有多囊卵巢綜合癥、卵泡發(fā)育遲緩的患者，該技術(shù)將未成熟的卵母細(xì)胞取出，在體外進(jìn)行培養(yǎng)、受精，然后將胚胎移植到母親子宮腔內(nèi)生長。

通過高倍放大形態(tài)學(xué)檢查選擇精液MICS技術(shù)，該技術(shù)用于對(duì)男性精子的選擇，可以提高成功率和嬰兒健康率。

精子卵漿內(nèi)注射及孵化PICS技術(shù)，該技術(shù)針對(duì)碎片率偏高的弱精少精、DNA碎片率偏高的男性不孕問題，可以有效降低12%的流產(chǎn)率，從而提高最終受孕結(jié)果。

睪丸穿刺精子抽提TESE技術(shù)，對(duì)于非阻塞性無精子癥的病人或者從附睪中未能抽取到精子的病人抽提精子。

試管嬰兒是一個(gè)復(fù)雜的醫(yī)學(xué)流程，其中還有大量的技術(shù)應(yīng)用，最終的目地都是為了提高成功率并減少并發(fā)傷害。

所有上述治療方法的體外受精程序類似，關(guān)鍵的區(qū)別在于實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)。 關(guān)于方法的選擇和決定，應(yīng)根據(jù)每個(gè)人的實(shí)際情況，由經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)生和胚胎學(xué)家單獨(dú)制訂方案，以選擇最有可能獲得成功的技術(shù)。